Tài liệu Nhân nhanh plb mẫn thiên hồng (doritaenopsis sp.) trong một số hệ thống khác nhau

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH ------------O0O----------- ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NHÂN NHANH PLB MÃN THIÊN HỒNG (Doritaenopsis sp.) TRONG MỘT SỐ HỆ THỐNG NUÔI CẤY KHÁC NHAU CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ NGÀNH: 111 GVHD:CN. BÙI VĂN THẾ VINH SVTH: TRẦN XUÂN NGỌC HUY TP. HỒ CHÍ MINH, THÁNG 07 NĂM 2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐẠI HỌC KTCN TP. HCM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC KHOA: MT & CNSH BỘ MÔN: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP HỌ VÀ TÊN: TRẦN XUÂN NGỌC HUY NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MSSV: 106111012 LỚP: 06DSH 1. Đầu đề đồ án tốt nghiệp NHÂN NHANH PLB MÃN THIÊN HỒNG (Doritaenopsis sp.) TRONG MỘT SỐ HỆ THỐNG NUÔI CẤY KHÁC NHAU. 2. Nhiệm vụ (yêu cầu về nội dung và số liệu ban đầu):  Xác định môi trường tối ưu nhất để nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.).  So sánh khả năng nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) trong một số hệ thống nuôi cấy khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc.  Bước đầu thực hiện nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) bằng hệ thống Bioreactor tự tạo. 3. Ngày giao Đồ án tốt nghiệp: ngày 01/04/2010. 4. Ngày hoàn thành Đồ án: 28/06/2010. 5. Họ tên người hướng dẫn CN. Bùi Văn Thế Vinh Phần hướng dẫn Toàn bộ Đồ án Nội dung và yêu cầu LVTN đã được thông qua Bộ môn Ngày …… tháng …… năm 2010 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH (Ký và ghi rõ họ tên) PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN Người duyệt (chấm sơ bộ):……………………………. Đơn vị:………………………………………………… Ngày bảo vệ:…………………………………………... Điểm tổng kết:………………………………………… Nơi lưu trữ Đồ án tốt nghiệp:…………………………. (Ký và ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn:  Ban Giám hiệu Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Khoa Môi Trường & Công Nghệ Sinh Học, cùng tất cả Thầy Cô đã truyền đạt kiến thức cho em trong suốt quá trình học tập tại Trường.  Thầy Bùi Văn Thế Vinh đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm và giúp đỡ em trong suốt thời gian thực hiện đề tài, cũng như khoảng thời gian bốn năm em được học tại Trường.  Thầy Cô quản lý phòng thí nghiệm: Thầy Huỳnh Văn Thành, Thầy Nguyễn Trung Dũng, Cô Vũ Ngọc Yến Ly đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ em hoàn thành tốt Đồ án này.  Xin gửi lời cảm ơn đến bạn Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Thu Thảo, Nguyễn Hoài Mỹ, Dương Thúy Vy, Thiều Quang Thiên Lý cùng tất cả các bạn trong lớp 06DSH đã gắn bó, giúp đỡ em trong suốt bốn năm qua.  Con xin vô cùng biết ơn Bố Mẹ, Các Chị cùng Em gái đã động viên, khuyên bảo và cổ vũ tinh thần để con hoàn thành tốt bốn năm đại học và Đồ án tốt nghiệp này. Sinh viên thực hiện: Trần Xuân Ngọc Huy MỤC LỤC Lời cảm ơn Mục lục Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt Danh mục các bảng Danh mục các hình vẽ, các đ62 thỊ, các bản vẽ MỞ ĐẦU ...................................................................................................................... 1 1. Mục đích nghiên cứu: .............................................................................................. 1 2. Ý nghĩa thực tiễn: .................................................................................................... 2 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU ............................................................................... 3 1.1. Sơ lược về Phong Lan Mãn Thiên Hồng: ............................................................. 3 1.1.1. Phân loại cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng: .................................................. 3 1.1.2. Sự sinh trưởng và phát triển của Mãn Thiên Hồng ngoài tự nhiên: ................... 3 1.1.3. Cây Mãn Thiên Hồng trên thị trường: ........................................................... 5 1.1.4. Các kỹ thuật nhân giống Mãn Thiên Hồng: ................................................. 10 1.2. Tiền củ: ......................................................................................................... 11 1.3. Kỹ thuật nhân giống in vitro (nuôi cấy mô tế bào thực vật): ................................. 13 1.3.1. Ưu và nhược điểm của kỹ thuật nhân giống in vitro: .................................... 13 1.3.2. Các giai đoạn trong quy trình nhân giống vô tính in vitro:............................. 14 1.3.3. Các vấn đề liên quan đến nhân giống in – vitro: ........................................... 17 1.3.3.1. Ảnh hưởng của mẫu cấy và môi trường đến nhân giống in – vitro: ............. 17 1.3.3.2. Tính bất định về mặt di truyền: ............................................................... 19 1.3.3.3. Việc sản xuất các chất gây độc từ mẫu cấy: .............................................. 19 1.3.3.4. Hiện tượng thủy tinh thể: ....................................................................... 20 1.4. Hệ thống nuôi cấy Bioreactor: .......................................................................... 21 1.4.1. Giới thiệu: ............................................................................................... 21 1.4.2. Cấu trúc và phân loại bioreactor: ................................................................ 22 1.4.2.1. Cấu trúc bioreactor: ............................................................................... 22 1.4.2.2. Phân loại bioreactor:.............................................................................. 23 1.4.3. Quy trình nhân sinh khối thực vật bằng kỹ thuật nuôi cấy lắc và bioreactor: ... 24 1.4.4. Sự phát triển thực vật trong bioreator:......................................................... 25 1.4.4.1. Quá trình phát sinh phôi soma: ............................................................... 25 1.4.4.2. Quá trình phát sinh cơ quan: ................................................................... 25 1.4.5. Một số vấn đề thường gặp trong nuôi cấy lỏng: ........................................... 26 1.4.6. Thuận lợi và khó khăn trong nuôi cấy bằng bioreactor: ................................. 27 1.4.6.1. Thuận lợi ............................................................................................. 27 1.4.6.2. Khó khăn: ............................................................................................ 28 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU........................................... 29 2.1. Thời gian và địa điểm nghiên cứu: .................................................................... 29 2.2. Vật liệu: ......................................................................................................... 29 2.2.1. Đối tượng nghiên cứu: .............................................................................. 29 2.2.2. Trang thiết bị và dụng cụ: .......................................................................... 29 2.2.3. Môi trường nuôi cấy: ................................................................................ 29 2.2.4. Điều kiện nuôi cấy trong phòng nuôi cấy in – vitro: ..................................... 30 2.3. Phương pháp bố trí thí nghiệm: ........................................................................ 30 2.3.1. Thí nghiệm 1: Khảo sát môi trường nhân nhanh PLB Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.). ...................................................................................... 30 2.3.2. Thí nghiệm 2: So sánh khả năng nhân PLB Mãn Thiên Hồng trong 3 hệ thống khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc. ......................................................................... 31 2.3.3. Thí nghiệm 3: Bước đầu thử nghiệm khả năng nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng bằng hệ thống Bioreactor tự tạo. .................................................................... 31 2.4. Phân tích thống kê:.......................................................................................... 32 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ....................................................................... 33 3.1. Khảo sát môi trường nhân nhanh PLB Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.): 33 3.2. Thí nghiệm 2: So sánh khả năng nhân PLB Mãn Thiên Hồng trong 3 hệ thống khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc. ..................................................................................... 38 3.3. Thí nghiệm 3: Bước đầu nghiên cứu khả năng nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng bằng hệ thống bioreactor tự tạo: ................................................................................. 41 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ ........................................................................... 43 4.1. Kết luận: ........................................................................................................... 43 4.2. Đề Nghị: ........................................................................................................... 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO ............................................................................................. 44 PHỤ LỤC ................................................................................................................... 46 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN: acid deoxynucleotide ABA: abscisic acid BA: 6 - benzyladenine BAP: N6 - benzylaminopurine CĐHSTTV: chất điều hòa tăng trưởng thực vật. Dtps: Doritaenopsis IAA: indole – 3 – acetic acid GA3: gibberellic acid KNA: potassium α naphtaleneacetate MS: Murashige và Skoog NAA: α – naphtaleneacetic acid PLB: protocorm – like - body Phal: Phalaenopsis 2,4-D : 2,4 – dichlorophenoxyacetic acid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1. Danh sách các loài Mãn Thiên Hồng trên thị trường. Bảng 2.1: Môi trường MS ½ bổ sung BA và NAA ảnh hưởng lên sự nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng. Bảng 3.1: Ảnh hưởng của các môi trường nuôi cấy khác nhau đến sự tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp. Bảng 3.2: Ảnh hưởng của BA lên sự tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng. Bảng 3.3: Ảnh hưởng của NAA lên sự tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng. Bảng 3.4: Ảnh hưởng của các hệ thống nuôi cấy khác nhau lên sự hình thành PLB Mãn Thiên Hồng. DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, CÁC ĐỒ THỊ, CÁC BẢN VẼ Hình 1.1: Mãn Thiên Hồng Hình 1.2: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại Hình 1.3: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại. Hình 1.4: Hình thái PLB được quan sát dưới kính hiển vi soi nổi. Hình 1.5: PLB được nhân nhanh trong môi trường rắn Hinh 1.6: Hai dạng bioreactor phổ biến Hình 3.1: Hệ thống bioreactor tự tạo. Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh MỞ ĐẦU 1. Mục đích nghiên cứu: Ngày nay, sự đam mê thưởng thức cây cảnh của người dân ngày càng một gia tăng, để đáp ứng nhu cầu đó, cùng với sự tiến bộ và phát triển của khoa học kỹ thuật, đặc biệt là công nghệ sinh học đã lai tạo ra nhiều loại hoa quý có nhiều màu sắc đa dạng và phong phú. Việc nhân giống bằng kỹ thuật thông thường như trước đây chưa cung cấp số lượng cây con cho thị trường tiêu thụ nên đòi hỏi phải có một kỹ thuật mới ra đời, đó là nhân giống vô tính in – vitro. Phong Lan Mãn Thiên Hồng là một trong những cây cảnh được mọi người ưa chuộng nhiều vì hoa có màu sắc đẹp, phát hoa có nhiều hoa, lâu tàn, dễ dàng chăm sóc và có thể đặt ở những nơi ít ánh sáng. Chính vì thế, rất tiện lợi khi trồng trong nhà, nên rất thích hợp cho việc trồng thưởng thức của người dân ở Thành Phố. Cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) có giá trị kinh tế cao ở trong nước cũng như nước ngoài. Trong tự nhiên cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng tăng trưởng chậm. Thông thường, việc tạo cây con trong tự nhiên được thực hiện bằng hạt và bằng cách tách chiết, tuy nhiên với phương pháp này thời gian nhân giống rất dài và hệ số nhân giống rất thấp, hơn nữa cây con tạo thành có sức sống không cao. Trong những năm gần đây, cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, ngành vi nhân giống cây trồng, đặc biệt trên đối tượng cây hoa lan từng bước phát triển, nhiều đơn vị nhà nước cũng như tư nhân đã mạnh dạn đầu tư để sản xuất cây giống phục vụ cho nông dân. Tuy nhiên việc phát triển sản xuất hoa lan trong nước còn gặp nhiều khó khăn đặc biệt là cây giống. Các cơ sở sản xuất cây giống trong nước không đủ đáp ứng nhu cầu sản xuất, các nhà vườn phải nhập cây giống từ nước ngoài bằng nhiều hạn nghạch khác nhau. Điều này rất khó khăn cho việc kiểm soát dịch bệnh và gây thụ động trong sản xuất hoa thương phẩm. Vì vậy, việc tập trung phát triển sản xuất cây giống trong sản xuất là cấp thiết ở nước ta hiện nay. . Đề tài “Nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) trong một 1 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh số hệ thống nuôi cấy khác nhau” nhằm mục đích tìm ra môi trường thích hợp nhất để nhân PLB Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp. nhằm đạt hiệu suất nhân giống cao nhất, đồng thời xác định với hệ thống nuôi cấy nào sẽ cho hiệu suất nhân nhanh cao nhất. Đồng thời bước đầu thử nghiệm trên hệ thống Bioreactor tự tạo. 2. Ý nghĩa thực tiễn: Hiện nay để nhân giống các loại Lan, giai đoạn nhân PLB – một giai đoạn chuyển tiếp từ hạt sang phôi – được ứng dụng rộng rãi và sử dụng phổ biến. Nó không những ảnh hưởng trực tiếp đến năng suất và chất lượng cây giống mà còn ảnh hưởng đến chất lượng hoa thương phẩm. Việc nhân PLB chất lượng cao là tiền đề thúc đẩy phát triển cây Lan giống trong nước, góp phần khắc phục hiện tượng thiếu hụt cây giống trong sản xuất hiện nay, từng bước nâng cao trình độ kỹ thuật nhân giống và thu nhập cho người sản xuất, hạn chế sự lây lan nguồn bệnh từ nước ngoài qua con đường nhập cây giống. 2 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Sơ lược về Phong Lan Mãn Thiên Hồng: 1.1.1. Phân loại cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng:  Cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) là loài cây đơn thân, sống biểu sinh, thuộc: Ngành: Magnoliophyta Lớp : Liliopsida Bộ : Orchidales Họ : Orchidaceae Hình 1.1: Mãn Thiên Hồng  Mãn Thiên Hồng là một loại lan lai. Chúng được lai từ Lan Hồ Điệp (Phalaenopsis sp.) và Kim Hồ Điệp (Doritis sp.). Do đó Mãn Thiên Hồng được mang cả hai ưu điểm của cây cha và mẹ như hoa nhiều, to, đẹp và cây dễ trồng, rất khỏe chịu đựng được nhiều mức độ khí hậu khác nhau. 1.1.2. Sự sinh trưởng và phát triển của Mãn Thiên Hồng ngoài tự nhiên:  Cơ quan dinh dưỡng: Cơ quan dinh dưỡng bao gồm một trục đơn thân, tạo ra bởi một đỉnh sinh trưởng hoạt động liên tục, có hai hàng lá, xếp đối diện, cách nhau bởi những đốt thân rất ngắn, không có giả hành. Lá hơi mọng nước hình dạng đơn giản (elipe thuôn dài, ngọn giáo), có bẹ ôm thân, lá dưới cùng héo rụng thì lá mới mọc lên từ ngọn. Tổng quan một cây có từ 4 – 5 lá hoạt động. Mỗi trục lá có hai chồi xếp chồng, chồi bên trên cho một trục phát hoa sau khi cảm ứng ra hoa, chồi bên dưới cho ra một cây con trong trường hợp có sự cố về hoạt động của đỉnh sinh trưởng ngọn. Rễ bất định khí sinh được mọc từ gốc của thân xuyên qua bẹ lá. Rễ rất nhiều và phân nhánh, rễ mập, dầy nạc, sự phân nhánh này tùy thuộc vào sự sinh trưởng của cây. Rễ bám chặt trên giá thể. 3 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Cây hút hơi nước trong không khí và những khoáng chất từ những cây mà nó sống bám trên đó, màu xanh của rễ cho thấy chắc chắn chúng có hoạt động quang hợp.  Cơ quan sinh sản: Sự tạo thành trục phát hoa sớm được phân biệt với sự phát triển của rễ. Sự xuất hiện của đầu trục phát hoa tạo thành một khe thẳng xuyên qua bao vỏ lá, trục phát hoa bên, đơn giản hay phân nhánh, mang hoa ở hai bên, hoa đính vào trục nhờ cuống hoa. Trong khi ấy, sự xuất hiện của rễ được ghi nhận bởi một sự mở vòng tròn. Khi một hay hai trục phát hoa sinh ra từ những chồi bên. Chúng sẽ cạnh tranh các chất dinh dưỡng của cây. Trong trường hợp hai phát hoa xuất hiện cùng một lúc, thì sự phát triển của nó tùy thuộc vào thứ tự ngọn, nhưng không phải lúc nào cũng có trường hợp trên. Trong giai đoạn trổ hoa, sự phát triển của cơ quan dinh dưỡng có phần bị chậm lại, nhưng nếu cây được tưới nước và dinh dưỡng đầy đủ thì cây vẫn tiếp tục tăng trưởng tốt. Những đoạn lóng mang các mầm hoa có chiều dài thay đổi rất khác nhau, tùy thuộc vào giống và chế độ trồng trọt (Troll, 1974) (trích từ Võ Thị Bạch Mai, 1996). Các mầm bên trên của nhánh phát hoa được bao bởi những lá thu nhỏ lại, mỗi mầm sẽ phát triển thành chồi dinh dưỡng hoặc chồi sinh sản sau khi xử lý chất điều hòa sinh trưởng thực vật (CĐHSTTV). Cây Mãn Thiên Hồng không có giai đoạn nghỉ, khi nhiệt độ thấp sự tăng trưởng của cây hoàn toàn chậm lại để cảm ứng ra hoa. Dưới cùng một chế độ cảm ứng như cùng một vĩ tuyến, vào mùa đông các cây trồng trong nhà kính thì thời kì trổ hoa tùy theo loài. Đối với những giống lai, giai đoạn trổ hoa khó có thể xác định một cách chính xác. Sau khi được thụ phấn, bầu noãn lớn dần, khoảng tám đến chín tháng sau thì trái chín. Trái chứa rất nhiều hạt, hạt nhỏ li ti, không có phôi nhũ, phôi không phân hóa. 4 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh 1.1.3. Cây Mãn Thiên Hồng trên thị trường: Bảng 1.1. Danh sách các loài Mãn Thiên Hồng trên thị trường. Tên Nguồn gốc Doritaenopsis Phalaenopsis Doritaenopsis Đặc điểm Tom Cành hoa dài, cánh Boy x Doritaenopsis hoa màu trắng. Môi (Mt Beauty x Hama màu đỏ, đôi khi có Lip) ánh hồng. Dtps (Minho Princess Hoa màu hồng với x Nobby's Purple) những đường kẻ sọc màu hồng, đôi khi có chấm. Doritaenopsis Doritaenopsis Dtps [I-Hsin Actor x Hoa màu trắng với (Tom Boy x Mount màu với môi màu đỏ Beauty)] tương phản. Dtps (Purple Gem x Hoa màu hồng và gần Taisuco Jewel) giống với Queen Beer. Doritaenopsis Dtps [Tom Boy x Hoa màu trắng trong (Mount suốt với các môi màu Beauty x Hama Lip) x I-Hsin hồng đến màu đỏ Actor] Doritaenopsis I-Hsin Model Được "KH6079" x (Sogo nhiều. Hoa có màu Davis Minho hồng đậm. Dtps x nhân giống Valentine) 86-3#1" Doritaenopsis Dtps (Sweet Cành hoa dài phân Strawberry x Luchia nhánh với những Smile) bông hoa màu hồng, đỏ tươi. Phal Ching Hua Hoa màu hồng với Spring x Dtps Nobby's những chấm nhỏ màu 5 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Doritaenopsis Chain Pink Lady trắng trên nền cánh Xen Pearl Doritaenopsis Princess hoa sẫm màu Fuchsia Dtps pulcherima x P Hoa màu sáng bóng Coral Gleam với những cánh môi sẫm màu Doritaenopsis Han Dtps (Tom Boy x Han Ben's Girl 'HB728' Ben's Lip) Những bông màu trắng, lớn. Tương phản với những cánh môi màu đỏ. Dtps. Phal Golden Peoker x Hoa màu trắng sữa Dtps Leopard Prince với những đường sọc I-Hsin Black Jack"KH5686#100" kẻ màu hồng. Dtps. I-Hsin Black Phal Golden Peoker x Hoa màu tím, cứng. Jack"KH5706’ Dtps Leopard Prince cánh môi màu trắng Doritaenopsis I-Hsin Golden Prince Hoa màu trắng được Phal Golden Sun x tô điểm them những Dtps Leopard Prince chấm màu trắng. I-Hsin Idol Phal Chih Đẹp nhất, dễ trồng. Shang's Stripes x Dtps Có hoa màu hồng. Doritaenopsis Minho Princess Doritaenopsis Doritaenopsis I-Hsin Purple Jewel Cành hoa trãi rộng Dtps Purple Gem x với những bông hoa Dtps Taisuco Jewel màu đỏ tươi I-Hsin Hoa màu trắng Sesame"KH5783#1" Phal Ching Buddha x Her Dtps Leopard Prince Doritaenopsis I-Hsin Dtps (Minho Stripes x 6 Hoa màu hồng đôi khi Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Spring cũng có loài màu Leopard Prince) trắng với những chấm đỏ. Doritaenopsis Doritaenopsis Vivien Sogo 'Golden Minho Venus Dtps Canh hoa dài, phân Minho nhánh. Chứa đến 11 Valentine x Phal New Cinderella hoa màu hồng tối. Dtps Sogo Alice x Hoa Phal Zuma's Pixie những Vivien' Doritaenopsis Salu ‘Taida’ màu tím với đường viền màu trắng kem. Taida Dtps (Salu Spot x Hoa màu đỏ tươi với Happy Beauty) những đường viền cánh hoa màu vàng kem. 7 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Hình 1.2: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại 8 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh Hình 1.3: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại. 9 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN. Bùi Văn Thế Vinh 1.1.4. Các kỹ thuật nhân giống Mãn Thiên Hồng:  Nhân giống in – vivo: Nhân giống Mãn Thiên Hồng bằng cách tạo cây con trên cọng phát hoa. Chồi của Mãn Thiên Hồng được tạo ra ngay trên đốt hoa có mang mầm ngủ bằng cách bao quanh đốt một lớp rêu nước để giữ ẩm (Shara, 1938, 1952) (trích trong Arditti và Ernst, 1993) [10]. Rêu nước cũng có thể được sử dụng tạo cây con từ các phần phát hoa cắt rời bằng phương pháp bán vô trùng (semiaseptic method) (Grimes, 1987)[13]. Trong những năm gần đây, chất điều hòa sinh trưởng thực vật được sử dụng để cảm ứng tạo cây con trên phát hoa trong in – situ. Cytokinin được trộn với chất mang và xử lý trực tiếp lên phát hoa (Võ Thị Bạch Mai, 1996 )[9] hay ở dạng bột nhão quấn quanh đốt hoa (McFarlane, 1977; Brasch và Kocsis, 1980). Để cho kết quả tốt nhất, vật liệu sử dụng là cây Mãn Thiên Hồng đã ra hoa chứa cả nụ hoa và hoa đã nở (Arditti và Ersnt, 1993).  Nhân giống in – vitro: Đốt phát hoa có mang mầm ngủ của cây Mãn Thiên Hồng được cắt thành những đoạn có kích thước 65mm được khử trùng và đặt trên môi trường biến đổi Vacin – Went. Kết quả là chồi được hình thành sau một tháng nuôi cấy. Hầu hết chồi đều có rễ khỏe sau hai tháng. Kết quả ghi nhận được từ nuôi cấy đoạn phát hoa có mang mầm ngủ của nhiều tác giả cho thấy từ các mầm ngủ gần cuối cùng của đoạn phát hoa sẽ phát triển tạo thành cây con trực tiếp còn các mầm ở vị trí trên sẽ phát triển tạo thành phát hoa thứ cấp, khi dùng phương pháp này không phá hủy và gây nguy hiểm đến cây mẹ, nhưng không được thuận lợi là sự hình thành mô sẹo rất khó xảy ra. Phương pháp này bị giới hạn chỉ có giá trị cho nhân giống tạo chồi từ đốt hoa nên hệ số nhân giống không cao (Arditti và Ersnt, 1993)[10]. Để cải thiện sự tăng trưởng chồi từ đốt thân Hồ Điệp người ta sử dụng các chất điều hòa sinh trưởng thực vật trong môi trường nuôi cấy, BAP kích thích tốt sự tăng trưởng chồi từ mầm ngủ (Koch, 1974)[14] . Khi 10