BỘ Y TẾ
BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
TRƯỜNG
ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
----------
ĐINH THÙY LINH
1201319
TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG
TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC-HILIC
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ
HÀ NỘI - 2017
BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
----------
ĐINH THÙY LINH
1201319
TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG
TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC-HILIC
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ
Người hướng dẫn:
1. PGS.TS. Phạm Thị Thanh Hà
2. ThS. Vũ Ngân Bình
Nơi thực hiện:
Bộ môn Hóa phân tích và Độc chất
HÀ NỘI - 2017
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
LỜI CẢM ƠN
Để hoàn thành được khoá luận này, tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ từ
thầy cô, gia đình cũng như bạn bè. Cho đến nay khi khoá luận đã hoàn thiện, tôi xin
N
Ơ
H
Đầu tiên, tôi xin phép được được gửi lời cảm ơn chân thành nhất tới PGS.TS
N
Phạm Thị Thanh Hà và ThS. Vũ Ngân Bình- Bộ môn Hóa phân tích và Độc chất
Y
U
Trường Đại học Dược Hà Nội, là những người cô đã tận tình hướng dẫn, chỉ
Qbảo, và
.
P Tôi cũng
động viên tôi trong suốt chặng đường khó khăn khi thực hiện khóa luận này.
T
xin cảm ơn PGS.TS Vũ Đặng Hoàng - Bộ môn Hóa phân tích và Độc
chất vì thầy đã
O
dành thời gian tra cứu và giúp đỡ tôi trong quá trình tìm tài liệu. Ạ
Đ
Tôi xin cảm ơn các thầy cô Bộ môn Hóa phân tích vàG
N Độc chất đã tạo điều kiện
cung cấp cho tôi các tài liệu cần thiết để giúp tôi hoànƯ
thành khóa luận này.
H
Tôi cũng xin được cảm ơn Ban giám hiệu,Ncác phòng ban, các thầy cô giáo và
Ầ Hà Nội-những người đã dạy bảo và
các cán bộ nhân viên trường Đại học Dược
R
T
trang bị cho tôi những kiến thức khoa học nền tảng trong suốt 5 năm học qua dưới
B
0
mái trường.
0
0
1
Và cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn thân thương đến ba mẹ, gia đình, bạn bè
A
Ó
cũng như cảm ơn tập thể
lớp M1K67 đã quan tâm, giúp đỡ tôi rất nhiều trong thời
H
- hiện khóa luận.
gian học tập và thực
Í
L
Một lần- nữa, xin chân thành cảm ơn tất cả những tình cảm và sự giúp đỡ mà
N
thầy cô,Ágia đình, bạn bè đã dành tặng cho tôi trong suốt thời gian khó khăn vừa qua.
TO
N
À
Đ
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
phép được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và chân thành nhất đến họ.
N
Ễ
I
D
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
Hà Nội, ngày 18 tháng 5 năm 2017
Sinh viên
Đinh Thùy Linh
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
MỤC LỤC
DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT
N
Ơ
DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ
H
ĐẶT VẤN ĐỀ.............................................................................................................N
1
Y
U 3
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC
.Q
P
1.1. Giới thiệu về sắc ký lỏng tương tác thân nước .................................................
3
T
O
1.2. Nguyên lý cơ bản của sắc ký lỏng tương tác thân nước ...................................
5
Ạ
Đ
1.2.1. Pha động .................................................................................................5
G
N
1.2.2. Pha tĩnh ...................................................................................................6
Ư
H
1.2.3. Cơ chế tách và các yếu tố ảnh hưởng .......................................................15
N
Ầ
1.2.4. Hệ thống phát hiện (Detector)R
...............................................................20
T
1.3. Ưu nhược điểm của HILIC .............................................................................
22
B
0
0
1.3.1. Ưu điểm ....................................................................................................
22
0
1
A
1.3.2. Nhược điểm. .............................................................................................
24
Ó
HDỤNG THỰC TẾ CỦA SẮC KÝ HILIC.............................25
CHƯƠNG 2: ỨNG
Í
L
2.1. Ứng dụng
- HILIC trong phân tích các acid amin, peptid và protein ...............25
2.2. Ứng
ÁNdụng của HILIC trong phân tích kháng sinh ..........................................27
2.3.
TOỨng dụng của HILIC trong phân tích các nucleotid, nucleosid, nucleobase .28
N 2.4. Ứng dụng của HILIC trong phân tích phospholipid .......................................29
À
Đ
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
DANH MỤC CÁC BẢNG
N
Ễ
I
D
2.5. Ứng dụng của HILIC trong phân tích carbohydrat.........................................30
2.6. Ứng dụng của HILIC trong phân tích các chất dẫn truyền thần kinh.............31
2.7. Ứng dụng của HILIC trên các đối tượng phân tích khác ...............................32
2.8. Thực tế ứng dụng HILIC ở Việt Nam ............................................................32
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
Chương 3. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ....................................................................34
1. Kết luận. .........................................................................................................34
N
Ơ
H
N
TÀI LIỆU THAM KHẢO
UY
PHỤ LỤC
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
Q
NG
B
0
0
A
N
Ễ
I
N
À
Đ
TO
ÁN
Í
-L
HÓ
10
T
N
Ầ
R
HƯ
O
Ạ
Đ
.
P
T
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
2. Đề xuất............................................................................................................34
D
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT
Tên tiếng Việt
ACN
Acetonitrile
Acetonitril
APCI
Atmospheric Pressure
Ion hóa tại áp suất khí quyển
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
Chemical Ionization
N
Ễ
I
D
CAD
Charged Aerosol Detector
Detector Aerosol tích điện
DMF
Dimethyl Formamide
Dimethyl Formamid
SPE
Solid Phase Extraction
Chiết pha rắn
UHPLC
Utra-High Performance Liquid
Sắc ký lỏng hiệu năng siêu cao
UY
Q
.
P
ELSD
Evaporative Light Scattering
Detector tán xạ ánh sáng bay hơi
T
Detector
O
Ạ
ESI
Electrospray Ionization
Ion hóa phun điện tử
Đ
HILIC
Hydrophilic Interaction
Sắc ký lỏngG
tương tác thân nước
N
Chromatgraphy
Ư
H
HPLC
High Performance Liquid
Sắc ký lỏng hiệu năng cao
N
Ầ
Chromatography
LOD
Limit of Detection
TR Giới hạn phát hiện
LOQ
Limit of Quantitation 0B
Giới hạn định lượng
0
MP
Mobile Phase
Pha động
0
1
MS
Mass Spectrometry
Khối phổ
A
Ó Liquid
NPLC
Normal Phase
Sắc ký lỏng pha thuận
H
Chromatography
Í
RID
Refrective
Detector chỉ số khúc xạ
- L Index Detector
RPLC NReversed Phase Liquid
Sắc ký lỏng pha đảo
Á Chromatography
O
T
TFA
Trifluoroacetic acid
Acid triflouroacetic
N
Tetrahydrofurane
Tetrahydrofuran
ĐÀ THF
N
Ơ
H
N
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
Tên tiếng Anh
Chromatography
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
DANH MỤC CÁC BẢNG
Bảng 1.1. Các cấu trúc khác nhau của các pha tĩnh được áp dụng cho việc phân tách
trong HILIC ................................................................................................................. 8
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
N
Bảng 1.2. Các loại tương tác giữa chất phân tích, pha tĩnh và pha động .................. 16 Ơ
NH
UY
.Q
P
T
O
Ạ
Đ
NG
HƯ
N
Ầ
TR
B
0
0
0
1
A
Ó
H
Í
L
ÁN
TO
N
À
Đ
N
Ễ
I
D
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ
Hình 1.1. Cơ chế phân tách trong một hệ thống HILIC ............................................ 18
N
Ơ
H
N
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
Q
UY
NG
B
0
0
A
N
Ễ
I
N
À
Đ
TO
ÁN
Í
-L
HÓ
10
T
N
Ầ
R
HƯ
O
Ạ
Đ
.
P
T
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
Hình 1.2. Lớp điện tích kép trên bề mặt pha tĩnh liên kết......................................... 20
D
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
ĐẶT VẤN ĐỀ
Trong nhiều năm gần đây, kỹ thuật sắc ký nói chung và sắc ký lỏng nói riêng
N
Ơ
trường, phân tích thuốc, lâm sàng. Trong số các kỹ thuật sắc ký lỏng, sắc ký phân H
N
bố là kỹ thuật thông dụng hơn cả và được chia làm hai loại dựa trên độ phânYcực
Uliquid
tương đối giữa pha tĩnh và pha động: sắc ký pha thuận - NPLC (normal phase
.Q
P
chromatography) và sắc ký pha đảo - RPLC (reverse phase chromatography) . Tuy
T
nhiên hiện nay đã có thêm nhiều kỹ thuật sắc ký lỏng khác được
O nghiên cứu, sử
Ạ
dụng để mở rộng ứng dụng trên nhiều đối tượng phân tíchĐvà khắc phục những
nhược điểm của các kỹ thuật sắc ký truyền thống. Một trong
NG số những kỹ thuật đó là
sắc ký lỏng tương tác thân nước - HILIC (hydrophilic
interaction liquid
Ư
H
chromatography). HILIC lần đầu tiên được đềNxuất bởi Alpert vào năm 1990. Kỹ
thuật sắc kí này sử dụng pha tĩnh phân cực Ầ
cùng với dung môi pha động phân cực.
R
So với NPLC, HILIC cải thiện khả năngThòa tan của chất phân tích nhờ sử dụng pha
0Bcơ của sắc ký pha thuận. So với RPLC, HILIC
động chứa nước so với pha động 0
hữu
0
phân tích được các chất phân1cực, ít hoặc không lưu giữ trên các cột sắc ký pha đảo.
Nhờ những ưu điểm này A
mà HILIC đang ngày càng nhận được nhiều sự quan tâm
Ó
H trên thế giới. Tuy nhiên đây là một kĩ thuật mới và số lượng
và dần trở nên phổ biến
Í nước còn ít. Vì vậy, việc có những hiểu biết đầy đủ về kỹ thuật
nghiên cứu ở trong
L
này là cầnNthiết để có thể áp dụng được kĩ thuật HILIC một cách phù hợp và hiệu
Á
quả hơn.
TO
N Vậy nên, khóa luận này được thực hiện với mong muốn đem đến một cái nhìn
À
Đ tổng quan về HILIC, cung cấp những hiểu biết cơ bản cũng như khả năng ứng dụng
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
được áp dụng trong nhiều lĩnh vực khác nhau như hóa sinh, sinh học, phân tích môi
N
Ễ
I
D
của nó trong phân tích và đặc biệt là trong nghành Dược, nhằm tạo một nền tảng cơ
bản cho việc ứng dụng kỹ thuật sắc ký HILIC trong điều kiện thực tế của Việt Nam.
Khóa luận được thực hiên với ba mục tiêu sau:
1. Tìm hiểu nguyên lý, cơ chế tách của sắc ký HILIC.
1
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
2. Phân tích ưu và nhược điểm của phương pháp HILIC so với các phương pháp sắc
ký khác.
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
Q
UY
NG
B
0
0
A
N
Ễ
I
N
À
Đ
TO
ÁN
Í
-L
HÓ
N
Ầ
R
T
10
HƯ
O
Ạ
Đ
.
P
T
N
Ơ
H
N
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
3. Tổng quan về các nghiên cứu ứng dụng HILIC trong ngành Dược.
D
2
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN VỀ SẮC KÝ LỎNG TƯƠNG TÁC THÂN NƯỚC
1.1. Giới thiệu về sắc ký lỏng tương tác thân nước
N
Ơ
sự khác nhau về cơ chế tách người ta chia sắc ký lỏng thành nhiều loại như sắc ký H
N
phân bố, sắc ký hấp phụ, sắc ký ion, sắc ký rây phân tử, sắc ký ái lực-miễn dịch.
Y
Trong đó, phổ biến nhất là sắc ký phân bố do khả năng ứng dụng rộng rãi trênUnhiều
.Q
đối tượng phân tích. Sắc ký phân bố được chia làm hai loại dựa trên P
sự phân cực
T
tương đối giữa pha động và pha tĩnh là sắc ký pha thuận (NPLC) và sắc ký pha đảo
O
Ạ
(RPLC). RPLC sử dụng các dung môi pha động phân cực như nước, đệm trong
Đ
nước an toàn và rẻ tiền nên được ứng dụng nhiều và phổ
Gbiến hơn so với NPLC.
N
Tuy nhiên, một trong những vấn đề gặp phải đối với
RPLC là sự kém lưu giữ đối
Ư
H
với các hợp chất phân tích rất phân cực. [17].
N
Ầ
Với các chất thân nước và tích điện có R
thể sử dụng sắc ký trao đổi ion với cơ chế
T
lưu giữ dựa vào tương tác Coulomb.BSắc ký trao đổi ion có thể được sử dụng cho
0
hầu hết các chất tan tích điện, từ 0
các ion vô cơ nhỏ đến các protein hay các đại phân
0
tử sinh học khác. Tuy nhiên, 1việc sử dụng sắc ký trao đổi ion cần dùng đến các cột
A
trao đổi ion khá đắt tiền.
Một lựa chọn khác là sắc ký tạo cặp ion, các chất phân tích
Ó
Htác nhân trong pha động giúp giảm độ phân cực của chất phân
được tạo cặp ion với
Í
tích, do đó tăngLlưu trên cột pha đảo. Phương pháp này sử dụng pha động chứa chất
tạo cặp ion
và
N sử dụng các cột RP ít tốn kém hơn và thường có hiệu quả tách tốt hơn
Á
so với
Otrao đổi ion. Tuy nhiên, khi thêm các thuốc thử ghép cặp ion ví dụ như TFA
T
hoặc natri heptansulfonat vào pha động thường làm giảm cường độ tín hiệu trong hệ
N
ĐÀ thống phát hiện bằng khối phổ chế độ phun điện tử (MS-ESI).
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
Kể từ khi ra đời sắc ký là một công cụ không thể thiếu trong phân tích. Dựa vào
N
Ễ
I
D
Với các chất thân nước và không tích điện, để tăng lưu giữ trong RPLC, người ta
biến đổi một hoặc nhiều nhóm chức phân cực của chất phân tích thành các nhóm ít
phân cực hơn bằng phản ứng hóa học, được gọi là kỹ thuật tạo dẫn xuất. Dẫn xuất
hoá làm tăng khả năng lưu giữ chất phân tích trên cột pha đảo và đôi khi cải thiện
3
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
khả năng phát hiện. Ví dụ formaldehyd, trong dung dịch nước chủ yếu tồn tại dạng
hydrat dihydroxymethan rất thân nước và khó phân tích bằng sắc ký pha đảo.
Formaldehyd phản ứng với 2,4-phenyl hydrazin trong môi trường acid chuyển
N
Ơ
hóa thường là lựa chọn tốt khi phản ứng tạo dẫn xuất đơn giản và chỉ tạo thành một H
N
sản phẩm duy nhất. Đối với các chất có chứa nhiều nhóm chức phân cực, các phản
Y
U dẫn
ứng thường tạo các sản phẩm phụ, có khuynh hướng khó tách được sau khi tạo
.Qcũng tốn
xuất do các sản phẩm tạo thành có thể khó tách ra khỏi nhau. Tạo dẫn xuất
P
T
nhiều thời gian và làm tăng độ không đảm bảo đo trong phân tích định lượng [17].
O
Ạ
Đ mạnh và không tích
Một hướng giải quyết khác để phân tích các chất phân cực
G tĩnh phân cực được làm
điện là dùng cách “đảo ngược RP”, một chế độ tách cóN
pha
giàu bởi một phần pha động phân cực. Sắc ký tươngƯtác thân nước (HILIC) là một
H
kỹ thuật như vậy. HILIC đã được biết đến vàoN
những năm 1970 và được định nghĩa
Ầ
bởi Alpert vào năm 1990 [53]. HILIC là R
một biến thể của sắc ký thông thường, sử
T
dụng pha tĩnh phân cực, pha động phân cực với các thành phần chính thường là 5B
0
40% nước hoặc đệm trong acetonitril
0 (ACN). Các chất phân tích được lưu giữ và
0
tách bằng cách tạo cân bằng 1
tại phân vùng giữa pha động và lớp nước hấp phụ trên
A
bề mặt pha tĩnh. Việc sử
dụng nước trong pha động mang lại cho HILIC một số lợi
Ó
HNPLC, việc chuẩn bị mẫu phức tạp hơn vì yêu cầu kiểm soát
thế so với NPLC. Với
Ídung môi nước. Dung môi dùng trong NPLC không phân cực và
L
hoàn toàn lượng
các chất phân
N tích phân cực thường có độ hòa tan thấp trong dung môi này. Khi
Á
phânO
tích bằng NPLC ta còn gặp khó khăn khi kết nối với detector MS-ESI vì dung
T
môi kém phân cực của NPLC làm giảm hiệu suất ion hóa. Trình tự rửa giải trong
N
À
Đ HILIC ngược lại với sắc ký pha đảo, thứ tự rửa giải từ kém phân cực nhất đến rất
www.daykemquynhon.ucoz.com
MailBox :
[email protected]
DẠY KÈM QUY NHƠN OFFICIAL ST> : Đ/C 1000B TRẦN HƯNG ĐẠO TP.QUY NHƠN
thành hydrazon, kém phân cực hơn thuận tiện cho phân tích bằng RPLC. Dẫn xuất
N
Ễ
I
D
phân cực, điều này giúp HILIC trở thành kỹ thuật bổ sung và giải quyết các vấn đề
của RP trong phân tích các chất phân cực. Khi HILIC được sử dụng kết hợp với RP-
SPE, dung môi dùng để rửa giải các chất phân tích từ thiết bị SPE có thể được tiêm
trực tiếp lên cột HILIC giúp tiết kiệm thời gian và ngăn ngừa sự mất mẫu. Nồng độ
ACN cao cũng mang lại cho HILIC hai ưu điểm khác là: độ nhạy cao trong ESI-MS
4
Đóng góp PDF bởi GV. Nguyễn Thanh Tú
www.facebook.com/daykemquynhonofficial
www.facebook.com/boiduonghoahocquynhonofficial
www.twitter.com/daykemquynhon
https://plus.google.com/+DạyKèmQuyNhơn
www.facebook.com/daykem.quynhon
www.daykemquynhon.blogspot.com
và tách nhanh hơn do độ nhớt thấp của các chất rửa giải HILIC so với RPLC. Như
vậy, HILIC khắc phục tốt các nhược điểm của các kỹ thuật sắc ký trước đó nên
ngày càng thu hút được nhiều sự chú ý và được áp dụng rộng rãi trong những năm
1.2. Nguyên lý cơ bản của sắc ký lỏng tương tác thân nước
.Q
P
Trong HILIC, pha động trở thành một phần không thể thiếu của pha
T tĩnh, tạo một
O hụt nước, tạo
lớp giàu nước trên bề mặt của pha tĩnh phân cực so với pha động thiếu
Ạ
Đphân bố giữa hai lớp
ra một hệ giống như chiết lỏng/lỏng. Các chất phân tích được
chất lỏng này.
NG
HILIC sử dụng pha động là các dung môi hữu cơƯ
H thân nước như acetonitril cùng
với một lượng nhỏ nước. Hỗn hợp 40-97% ACN
trong nước hoặc đệm dễ bay hơi
N
Ầít nhất là 3% đủ để hydrat hóa các hạt
thường được sử dụng. Lượng nước yêu cầu
R
T
pha tĩnh. Tuy nhiên, bất kỳ một dung môi không proton đồng tan với nước nào cũng
B
0
có thể được sử dụng làm pha động
0 cho HILIC (ví dụ tetrahydrofuran-THF hay
0
1 sử dụng tuy nhiên cần dùng ở nồng độ cao để đạt
dioxan). Alcol cũng có thể được
A
được cùng một mức độ Ó
lưu giữ các chất phân tích so với các dung môi khác [88].
H
Dưới đây là danh- sách các dung môi theo chiều tăng lực rửa giải:
Í
L
Aceton < isopropanol
~ propanol
- Xem thêm -