Tài liệu Bố trí thí ngiệm oxh

1. Các tính chất của gốc tự do DPPH - Là gốc tự do bền do có hiệu ứng liên hợp trong phân tử. - Độ hấp thụ cực đại tại 517 nm do gốc tự do trên Nitơ và cho màu tím trong Methanol [1]. - Có công thức cấu tạo như sau : - Cơ chế phản ứng của gốc tự do DPPH và chất chống oxy hóa : DPPH ˉ + AH ↔ DPPH-H + A˙ - Kết quả được đánh giá thông qua giá trị IC50 (inhibitory concentration) là nồng độ chất oxy hóa cần để ức chế (trung hòa) 50% gốc tự do DPPH trong khoảng thời gian xác định. - Mẫu Vitamin C được dùng để so sánh thông qua giá trị IC50. 2. Cách tiến hành  Pha mẫu: - Lấy 2ml dịch trích + 5 ml Methanol, lắc đều. Nồng độ mẫu lúc này là 400 µg/ml. - Pha loãng mẫu: Pha loãng nồng độ mẫu xuống 2, 4, 8, 16 lần. Bảng 3.2: Độ pha loãng và nồng độ mẫu dịch trích Độ pha loãng (lần) 2 4 8 16 Nồng độ mẫu dịch trích (µg/ml) 100 50 25 12,5  Pha thuốc thử : - Cân 2,7 mg DPPH cho vào bình định mức 25 ml. - Thêm 25 ml MeOH, lắc mạnh cho tan hết, sau đó thêm MeOH vào cho đủ 25 ml. - Để ổn định trong tối 30 phút, 4ºC.  Pha dung dịch chuẩn: - Cân 2 mg vitamin C vào bình định mức 5ml. - Thêm 3 ml MeOH vào, lắc mạnh cho tan hết, sau đó thêm MeOH vào cho đủ 5 ml. Nồng độ vitamin C lúc này là 400 µg/ml. - Pha loãng dung dịch chuẩn xuống 2, 4, 8, 16 lần bằng MeOH. Bảng 3.3: Độ pha loãng và nồng độ vitamin C. Độ pha loãng (lần) 2 4 8 16 Nồng độ mẫu vitamin C (µg/ml) 100 50 25 12,5  Đo dung dịch chuẩn - Cho 1ml DPPH vào 1ml dung dịch chuẩn ở từng độ pha loãng. - Để ổn định trong bóng tối 30 phút. - Đo độ hấp thụ quang (OD) ở bước sóng 517nm.  Đo mẫu - Cho 1ml DPPH vào 1ml mẫu dịch trích ở từng độ pha loãng. - Để tất cả vào trong bóng tối, 30 phút. - Đo độ hấp thụ quang (OD) ở bước sóng 517 nm. 3. Tính kết quả của thử nghiệm chống oxy hóa % Ức chế DPPH = (Ao- A)/Aox 100 Đo độ hấp thu của DPPH : A0= 1,67458. A: Độ hấp thu của dung dịch phản ứng. IC50: Nồng độ ức chế 50% gốc DPPH. Khả năng ức chế gốc tự do được đánh giá bằng phương pháp gốc tự do bền DPPH. Kết quả đo OD đối với vitamin C Vitamin C được đo 3 lần và lấy giá trị trung bình. Bảng 1: Nồng độ và kết quả đo OD của vitamin C Nồng độ vitamin C (µg/ml) 100 50 25 12,5 A (OD đo ở 517 nm) Dựng đường chuẩn và tính IC50 bằng cách ngoại suy Kết quả đo OD đối với dịch trích lá Sen Dịch trích mẫu Sen được đo 3 lần và lấy giá trị trung bình. Bảng 2: Nồng độ và kết quả đo OD của dịch trich lá Sen Nồng độ dịch trích lá sen (µg/ml) 100 50 25 12,5 A (OD đo ở 517 nm) Dựng đường chuẩn và tính IC50 bằng cách ngoại suy 1. Bùi Trọng Đạt, Phùng Văn Trung, Phan Nhật Minh, Hoàng Thị Ngọc Dung và Phạm Cao Thanh Tùng, 2003. Xây dựng quy trình thử hoạt tính kháng oxy hóa DPPH và sàng lọc một số cao chiết từ cây cỏ Việt Nam.Tuyển Tập Công Trình Nghiên Cứu Khoa Học và Công Nghệ năm 2003; tr.150-155.